實(shí)驗室檢測水中總大腸菌群的三種方法比較分析

　　現在人們對于生活飲用水的水質(zhì)要求逐漸提高，水資源的污染問(wèn)題也成為關(guān)注焦點(diǎn)。為預防水中微生物對人體健康造成威脅，我國會(huì )對生活飲用水進(jìn)行嚴格的檢驗檢測，其中水中總大腸菌群的檢測是非常重要的一項。

　　飲用水中的總大腸菌群主要是指大腸桿菌、大腸菌群和糞大腸菌群三大類(lèi)型細菌共同組成的大腸菌群。水中大腸菌群數的多少，表明水體被糞便污染的程度，并間接表明腸道致病菌存在可能性的大小，因此，總大腸菌群是評價(jià)飲用水水質(zhì)的重要指標。目前實(shí)驗室常用的水中總大腸菌群檢測方法主要有多管發(fā)酵法、濾膜法、酶底物法等，下面優(yōu)爾普儀器結合實(shí)際工作經(jīng)驗對三種方法進(jìn)行簡(jiǎn)單的分析。

實(shí)驗室水中總大腸菌群三種檢測方法比較分析

方法一：濾膜法

　　濾膜法是用孔徑為0.45微米的微孔濾膜過(guò)濾水樣，將濾膜貼在添加乳糖的選擇性培養基上，然后在37℃的環(huán)境下培養24小時(shí)，培養基上能形成需氧和兼性厭氧的革蘭陰性無(wú)芽孢桿菌，計算濾膜上生長(cháng)的總大腸菌群數，以100ml水樣中總大腸菌群數作為報告結果。

　　濾膜法選擇的檢測培養基一般有m-Endo型培養基和Tergitol-TTC型培養基兩種，前者可在培養基上形成帶有金屬光澤的紅色菌落，后者可形成橙黃色的菌落。

濾膜法優(yōu)點(diǎn)：可定量計數，無(wú)干擾因素下的準確性較高。

濾膜法缺點(diǎn)：對于在處理工程中因為化學(xué)和物理因素引起的大腸菌群非致死性損傷，無(wú)法在培養基上形成菌落;實(shí)驗周期長(cháng)，通常需要2到3天;特異性不高，結果易受水樣中其他細菌的影響，假陽(yáng)性高，需要進(jìn)一步實(shí)驗驗證。

方法二、多管發(fā)酵法

　　多管發(fā)酵法是將水樣進(jìn)行10倍稀釋?zhuān)缓蠓謩e接種到乳糖蛋白胨培養液中，在35℃的環(huán)境中培養48小時(shí)，觀(guān)察細菌的生長(cháng)情況。將產(chǎn)酸產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉種在伊紅美籃瓊脂平板上，進(jìn)行分離培養，并通過(guò)革蘭染色、鏡檢等步驟進(jìn)行驗證試驗。結果通過(guò)MPN檢索表即可查到100ml水樣中總大腸菌群的可能數值。

多管發(fā)酵法優(yōu)點(diǎn)：適用于檢測大面積的水樣;實(shí)驗方法成本較低;對操作人員專(zhuān)業(yè)素養要求不高，經(jīng)過(guò)微生物學(xué)基本培訓的技術(shù)人員即可操作;可檢測濁度較大的水樣。

多管發(fā)酵法缺點(diǎn)：若存在非大腸菌群細菌的干擾，無(wú)法準確定量;實(shí)驗周期較長(cháng)，通常需要96小時(shí)以上;通過(guò)MPN表檢索并計算得出大概的實(shí)驗結果，可能造成漏檢，精確性一般。

方法三：酶底物法

　　酶底物法是今年剛寫(xiě)入國標的水質(zhì)大腸菌群檢測方法，其具體操作步驟如下：

　　用100ml定量瓶量取100ml水樣(若水樣污染嚴重時(shí)可進(jìn)行稀釋)，加入專(zhuān)用的酶底物檢測試劑，蓋上瓶蓋，輕輕搖晃均勻使其溶解。將混合均勻的溶液倒入定量孔板中，然后放進(jìn)程控定量封口機進(jìn)行隨機分配和加熱封口。將封過(guò)口的定量孔板放在培養箱中，溫度設定為36℃，培養24小時(shí)。培養完成后，孔格顯示為黃色即為陽(yáng)性，無(wú)色或顯色明顯淺于陽(yáng)性色盤(pán)的為陰性，計算黃色孔格數并查詢(xún)對照51MPN表或97MPN表，結果即為100ml水樣中大腸菌群的含量，若水樣進(jìn)行稀釋?zhuān)砀窠Y果乘上稀釋倍數即為實(shí)驗結果。

酶底物法100ml水樣定量瓶

酶底物法定量檢測孔板

酶底物法優(yōu)點(diǎn)：檢測范圍大，100ml水樣中可檢出1-2419個(gè)目標;可精確檢出100ml水樣中的單個(gè)細菌，假陰性低;酶底物試劑可抑制上百萬(wàn)個(gè)異養細菌，假陽(yáng)性低;準確性高，無(wú)需驗證實(shí)驗;實(shí)驗周期短，時(shí)間不超過(guò)24小時(shí);操作簡(jiǎn)單，培訓一次就能輕松使用;適用于大量樣品的批量快速檢測。

酶底物法缺點(diǎn)：需要購買(mǎi)程控定量封口機和酶底物試劑，相對來(lái)說(shuō)成本稍微高一些。

　　以上就是對濾膜法、多管發(fā)酵法、酶底物法檢測水中總大腸菌群的簡(jiǎn)單介紹和比較分析，從中可以看出的是，酶底物法作為國標中新推出的檢測方法，有著(zhù)較多的優(yōu)勢，除了能滿(mǎn)足基本的實(shí)驗要求外，也減少了實(shí)驗時(shí)間，能應對突發(fā)的事件，彌補了早前兩種方法的不足，這里優(yōu)爾普儀器建議有條件的實(shí)驗室配置使用。